使用奧林巴斯進口顯微鏡 CX43 進行熒光轉染觀察，可按照以下步驟進行操作，以清晰觀察到熒光轉染后的細胞狀態(tài)及熒光表達情況：

實驗準備

確保已完成細胞的熒光轉染操作，并在合適的時間點將細胞準備好用于觀察。轉染后的細胞需在培養(yǎng)器皿（如培養(yǎng)皿、多孔板）中培養(yǎng)，使其達到適宜觀察的狀態(tài)。

準備好顯微鏡配套的熒光濾光片組，根據(jù)所使用的熒光標記物選擇合適的濾光片。常見的熒光標記物有綠色熒光蛋白（GFP）、紅色熒光蛋白（RFP）等，不同的熒光蛋白需要使用對應的激發(fā)光和發(fā)射光濾光片。

打開奧林巴斯顯微鏡 CX43 的電源，預熱光源，讓其穩(wěn)定發(fā)光，同時調(diào)節(jié)顯微鏡的亮度至適中水平。

放置樣本

將含有轉染細胞的培養(yǎng)器皿小心放置在顯微鏡的載物臺上，使用載物臺上的固定裝置（如玻片夾）將其固定好，避免在觀察過程中發(fā)生移動。

通過載物臺的移動旋鈕，將培養(yǎng)器皿中的細胞區(qū)域移動到物鏡的正下方，使需要觀察的部位大致處于視野中心位置。

低倍鏡觀察定位

轉動物鏡轉換器，將低倍物鏡（如 4 倍或 10 倍）轉至工作位置，使其對準通光孔。

從側面注視物鏡，同時轉動粗準焦螺旋，使載物臺緩慢上升，直到物鏡接近培養(yǎng)器皿（注意不要讓物鏡碰到培養(yǎng)器皿，一般距離約 0.5 - 1 厘米）。

從目鏡中觀察，緩慢轉動粗準焦螺旋，使載物臺下降，直到看到模糊的細胞圖像。再轉動細準焦螺旋，使細胞圖像清晰。

在低倍鏡下觀察整個細胞培養(yǎng)區(qū)域，找到細胞分布較為均勻且熒光表達相對明顯的區(qū)域，將其移至視野中央，以便后續(xù)切換高倍鏡進行詳細觀察。

熒光觀察模式切換

確定好觀察區(qū)域后，切換顯微鏡至熒光觀察模式。根據(jù)所使用的熒光標記物，選擇對應的熒光濾光片組。例如，觀察 GFP 標記的細胞，需選擇能夠激發(fā)綠色熒光并過濾出相應發(fā)射光的濾光片組。

打開熒光光源，調(diào)節(jié)熒光光源的強度，避免過強的熒光導致細胞圖像過曝或熒光淬滅，同時也要確保能夠清晰觀察到熒光信號。

高倍鏡觀察

轉動物鏡轉換器，換用高倍物鏡（如 20 倍或 40 倍）進行更詳細的觀察。由于高倍物鏡的工作距離較短，此時不能再使用粗準焦螺旋，只能通過轉動細準焦螺旋來微調(diào)焦距，使細胞和熒光圖像清晰。

在高倍鏡下仔細觀察細胞的形態(tài)、熒光的分布和強度。注意觀察熒光是在細胞的哪個部位表達，如細胞質、細胞核或細胞膜等，以及熒光的表達是否均勻。同時，觀察不同細胞之間熒光表達的差異。

圖像采集與記錄

使用顯微鏡配備的數(shù)碼攝像頭或連接電腦的圖像采集系統(tǒng)，拍攝觀察到的細胞熒光圖像?？梢耘臄z不同視野、不同曝光時間下的圖像，以獲取最佳的觀察效果。

在拍攝圖像時，記錄下圖像的放大倍數(shù)、熒光濾光片組的選擇、曝光時間等參數(shù)，以便后續(xù)對圖像進行分析和對比。

對拍攝的圖像進行標注，注明樣本的來源、轉染的時間、觀察的時間等信息，方便實驗數(shù)據(jù)的整理和分析。

觀察結束與設備維護

觀察結束后，關閉熒光光源和顯微鏡的電源。將培養(yǎng)器皿從載物臺上取下，按照實驗室的廢棄物處理規(guī)定進行處置。

清潔顯微鏡的載物臺、物鏡、目鏡等部件，去除可能殘留的細胞培養(yǎng)基或其他污染物。將顯微鏡恢復到初始狀態(tài)，妥善保管，定期進行維護和校準，以確保其性能的穩(wěn)定性和觀察的準確性。